Нашите оперативни методи, детайли и теоретични обяснения ще станат насоки за вашата работа, като например поставянето на хранителни разтвори и клетъчни колби; стерилизационни процедури; За да научите правилното им действие, е необходимо да им обърнете внимание за първи път.
Подхранване на клетки като отглеждане на деца
Клетките са наистина крехки. Най-добре е да го проверявате всеки ден, за да предотвратите необичайни явления като липса на вода, въглероден диоксид, прекъсване на захранването и недостатъчна температура в инкубатора. Също така е необходимо да се решат тези произшествия навреме, за да се избегне по-голяма болка, причинена от повтарящи се експерименти. .
Добрите клетки трябва да бъдат засети навреме
Клетките се пасират на партиди, така че дори ако една партида се провали, има резервна. Може да не е лесно за обикновения човек като последния. Но това е урокът на моята кръв. След като клетките бяха заразени, цялата армия беше унищожена. По това време съжалявам, че не защитих семето.
Всяка клетка има свои собствени характеристики и трябва да се третира по различен начин.
Клетките са същите като човешките и различните клетки имат различни характеристики на културата. Бъдете внимателни в процеса на отглеждане. Различните клетъчни линии използват различни среди и серум.
Например гладкомускулните клетки, които отглеждам, са много активни и обичат да са живи. След 2-3 дни ще има голямо население, а аз не обичам много да ям и пия. Това наистина е най-доброто дете за отглеждане. Ендотелните клетки и гладкомускулните клетки имат сходни характеристики, но са много нехигиенични и небрежни. В тях има много секреторни клетки, така че трябва да се сменят и мият често. Клетките RAW264.7 също са много весели и много годни за консумация. Необходимо е да ги храните често. Главоболието е, че клетките лесно се активират. Хубаво е бутилката и средата, в която се култивират да са без ендотоксини, но ми е трудно като майка да ги задоволя.
Подготовка за работа преди тренировка
Включително работа с консумативи, конфигурация на реагенти, тестове за стерилност и др.
Почистване на стъклария. За стъклени съдове (бутилка с клетки, бутилка, съдържаща хранителен разтвор, малка бутилка с пеницилин и т.н.), първо използвайте прах за пране за почистване (обърнете внимание на мъртвите ъгли) и след това изплакнете. Накиснете в киселинен разтвор за повече от 24 часа, след това изплакнете с чиста вода 10 пъти, за да отстраните остатъчния киселинен разтвор. Бутилките и т.н. се разклащат енергично по време на изплакването. След това се накисва в двойно дестилирана вода за 24 часа. След като изсъхне, увийте го и го изсушете на 160 градуса за 2 часа.
Конфигурация на реагента. Като течност за клетъчна култура обикновено може да се използва повече от двойно дестилирана вода. И обърнете внимание на регулирането на pH стойността.
Тест за стерилност. Основно използвайте филтърна стерилизация: като трипсин, антибиотици, G-418 разтвор, различни среди, натриев пируват, глутамин и др. Някои могат да бъдат автоклавирани: PBS, D-Hank's и др.
Реагентите се съхраняват в аликвоти
Включително хранителен разтвор, панкреатин, серум и др.
Серумът е особено важен. Серумът трябва да се съхранява при -20 градуса. Ако една бутилка не може да се използва наведнъж, 40-50ml може да се разпредели в стерилни бутилки, обработени с киселина, или дори да се съхранява в бутилки с пеницилин. Обикновено серумът, предоставен от производителя, е стерилен и не изисква стерилна филтрация. Ако в серума се открие много суспендирано вещество, серумът може да се добави към средата и да се филтрира заедно, като серумът не трябва да се филтрира директно. (Няма ефект върху клетъчната култура при нормални обстоятелства)
Бутилираният серум трябва да се размразява постепенно: 4 градусов хладилник се разтваря напълно и след това се разделя на опаковки. По време на процеса на разтваряне трябва да се разклаща редовно (внимавайте да не се образуват въздушни мехурчета), за да се уеднаквят температурата и съставът и да се намали появата на утаяване. Не размразявайте директно от –20 градуса до 37 градуса, тъй като температурата се променя твърде много, което може лесно да причини коагулация на протеини и утаяване.
Топлинното инактивиране се отнася до нагряване на напълно размразения серум при 56 градуса за 30 минути. След като водната баня се покачи до 56 градуса, поставете серума, изчакайте температурата да се повиши до 56 градуса и пребройте времето, обикновено го разклащайте равномерно веднъж на около 5 минути. Целта на тази термична обработка е да деактивира компонентите на комплемента в серума. Освен ако не е необходимо, тази топлинна обработка обикновено не се извършва, защото ще доведе до значително увеличаване на утайката и ще повлияе на качеството на серума. Обърнете внимание на ефекта от промяната на серума (включително различни партиди) върху клетките.
Силно чувство за стерилност
Преди експеримента ултрачистият стенд беше стерилизиран чрез облъчване с ултравиолетова светлина в продължение на 30 минути, асептичната работна повърхност беше избърсана със 70 процента етанол и ултрачистият вентилатор на стенда беше включен за няколко минути преди началото на експерименталната операция .
За да научите повече за лабораторната клетъчна култура, моля, щракнете върху: http://www.shjasw.com/