PCR откриване
Полимеразната верижна реакция (PCR) използва парче ДНК като матрица и с участието на ДНК полимераза и нуклеотиден субстрат, ДНК се амплифицира до достатъчно количество за структурен и функционален анализ. Методът за откриване на PCR има изключително важно значение в клиничната бърза диагностика на бактериални инфекциозни заболявания.
Принципът на PCR се използва за амплифициране на ДНК фрагмент, разположен между две известни последователности, подобно на процеса на репликация на естествената ДНК. Молекулата на ДНК, която трябва да бъде амплифицирана, се използва като матрица и двойка олигонуклеотидни фрагменти, комплементарни на 5'края и 3'края на шаблона, се използват като праймери. Под действието на ДНК полимеразата тя следва шаблона според полурезервирания репликационен механизъм. Удължаване на веригата до завършване на нов синтез на ДНК, повторете този процес, целевият ДНК фрагмент може да бъде амплифициран.
(PCR) е метод за ензимно синтезиране на специфични ДНК фрагменти in vitro. Състои се от няколко стъпки на високотемпературна денатурация, нискотемпературно отгряване и подходящо температурно удължаване. Характеристики като висока чувствителност, лесна работа и спестяване на време. Може да се използва не само в основни изследвания като изолиране на гени, клониране и анализ на последователността на нуклеинови киселини, но и при диагностициране на заболявания или всяко място, където има ДНК и РНК. Полимеразната верижна реакция (полимеразна верижна реакция, PCR за кратко) е известна още като безклетъчно молекулярно клониране или специфична ДНК последователност in vitro праймер-насочена ензимна амплификация.
Полурезервираната репликация на ДНК е важен начин за биологична еволюция и преминаване. Двуверижната ДНК може да бъде денатурирана и разтопена в единична верига под действието на различни ензими. С участието на ДНК полимераза и промотор, двойноверижната ДНК може да бъде репликирана в същите две молекули съгласно принципа на комплементарно сдвояване на бази. В експерименти беше установено, че ДНК може също да бъде денатурирана и разтопена при високи температури и може да бъде ренатурирана в двойни вериги отново, когато температурата се понижи. Следователно, чрез контролиране на денатурацията и ренатурирането на ДНК чрез температурни промени и проектиране на праймери като промотори, добавянето на ДНК полимераза и dNTP може да завърши ин витро репликацията на специфични гени.
Простият въпрос е да използвате специално оборудване, да използвате dNTPS, Mg2+, специфични праймери, ДНК полимераза и буферна система, да добавите шаблон, който е ДНК пробата за in vitro амплификация, и да извършите електрофореза. Ако може да се амплифицира и размерът на амплифицирания продукт съответства на целевата лента, това означава, че праймерът и шаблонът са специфични и индексът на откриване е положителен.
Методи и стъпки за откриване на PCR нуклеинова киселина
Тестването на нуклеинова киселина изисква пет стъпки: вземане на проби, задържане на проба, задържане, екстракция на нуклеинова киселина и компютърно тестване.
Откриване на нуклеинова киселина
Първата стъпка е да се съберат човешки секрети и да се изтрие носната кухина или задната стена на фаринкса и двустранните фарингеални сливици с назален тест или тест за фаринкса.
Във втората стъпка медицинският персонал задържа пробата, потапя главата на теста в разтвора за консервиране на клетките и завинтва капачката на тръбата веднага след счупването на опашката.
В третата част поставете пробата в херметична торбичка, запазете я и я изпратете навреме за проверка.
Четвъртата стъпка е изпращането на пробата в лабораторията за извличане на нуклеинова киселина.
В петия етап екстрактът се подлага на реакция на флуоресцентна PCR амплификация.
Необходими са и консумативи и инструменти
Добавени са PCR инструмент, PCR епруветка, накрайник за пипета, дълбока ямкова плака, резервоар и реагенти