За обичайните петриеви панички със стъклено дъно на пазара обикновено се прави дупка на дъното на пластмасова петриева паничка и след това покривно стъкло или предметно стъкло с дебелина 170-220 μm се залепва към дъното на петриево блюдо с лепило без сенки или силикагел. Не цялото дъно на петриевото блюдо е направено от стъкло. Подходящата зона за наблюдение е само в областта на перфорацията. Въпреки това, поради хидрофобността на стъклото, когато се култивират клетки, клетките не могат да се прилепят добре към стъклото и състоянието на растеж не е добро и дори феноменът на клетъчно разслояване възниква по време на изображения с конфокално сканиране.
За да могат клетките да прилепнат добре, е необходимо да се потвърди, че специфичните протеинови реагенти са покрити, преди да се използват съдове със стъклено дъно за клетъчна култура.
направи си сам юрган
Различните клетъчни култури изискват различни покриващи реагенти. В същото време, тъй като протеинът, използван за покритие, е биологичен продукт, чистотата на продукта и дозировката на протеина за покритие на различните компании са различни. Тази техническа публикация е само за справка. Конкретната дозировка на покриващите реагенти трябва да се отнася до инструкциите на използваните марки. . И най-добре е да направите градиентен експеримент с реактивите, които използвате, за да намерите най-подходящата концентрация на покритие.
Ето пример за поли-L-лизин (PLL, сигма, P4832, 100ug/ml):
PLL покритието е подходящо за по-голямата част от клетките, особено за културата на неврони в централната система. Необходимо е съдържанието на протеин (ug/cm2) на единица площ да достигне желаното количество по време на употреба. Препоръчителното количество покритие за PLL в този пример е 2 ug/cm2. Необходимо е да се изчисли необходимото количество протеин според площта и обема на покритието.
Например: петриево блюдо със стъклено дъно от 35 mm, площта на растеж на клетките е 3,5 cm2, площта на покритието е 4,1 cm2, а обемът на покриващия разтвор е 400 ul, тогава препоръчителната доза е 2 ug/cm2. Тогава са необходими 8,2 ug PLL в една ямка. Ако се добавят само 400 ug PLL разтвор, концентрацията на PLL разтвор е 20,5 ug/ml (около 20 ug/ml). Следователно основният разтвор трябва да се разреди с ултрачиста вода.
Конкретни стъпки:
1. Разредете изходния разтвор на PLL 1:5 с ултрачиста вода.
2. Добавете 400 ul разреден PLL към всяко петриево блюдо със стъклено дъно 35 mm.
3. Инкубирайте за 1-2 часа при стайна температура и аспирирайте PLL разреждането.
4. Внимателно измийте 3 пъти с 2 ml PBS разтвор или среда без серум и аспирирайте промивния разтвор.
5. Директно добавете клетъчната суспензия за култивиране.
Оценка на метода
Поради различните свойства на различните покриващи протеини, различните покриващи протеини се използват по различни начини. Често се създава ново замърсяване поради необходимостта от покриване на съдове със стъклено дъно. Освен това замърсяването често се открива, след като клетките са били повдигнати, което не само забавя времето, но и губи консумативи за комплекта. В края на краищата протеиновите реагенти с покритие и съдовете със стъклено дъно с гарантирано качество са скъпи (чиниите със стъклено дъно с лошо качество могат да протекат, защото лепилото не е лепкаво или използваното лепило е токсично за клетките).
Конфокални петриеви панички без покритие
За деца, които искат да спестят време и усилия, е по-удобно да използват съдове за конфокална култура без покритие.
Факторите, които трябва да имате предвид при избора на подходяща чаша за култура, са: дали тя е подходяща за прилепване към вашите собствени клетки, дали оптичните характеристики на чашата за култура отговарят на конфокалните изисквания.
Петриевите блюда, които отговарят на изискванията на горните фактори, не се ограничават до съдове със стъклено дъно с покритие. Всъщност всеки знае, че пластмасовите съдове са по-евтини и по-лесни за залепване на клетки от стъклените. Ето пример за конфокална културна чиния от Shanghai Jingan, за да говорим за параметрите, които трябва да притежава една културна чиния, подходяща за конфокални експерименти:
Може да се види, че физическите параметри на съдовете за конфокална култура, които отговарят на изискванията за директна употреба, са много близки до стъклото, но в същото време те също имат хидрофилни свойства, което може да направи повечето клетки по-добри; и пластичността са по-добри от стъклото. Той позволява на повечето клетъчни линии и първични клетки да се залепят директно към стената и не е чуплив, което е добър избор.
Можете също така да намерите най-подходящата чаша за конфокална култура за вашия експеримент според вашите специфични експериментални изисквания и параметрите в таблицата по-горе.
Оценка на метода
Изборът на този тип петриево блюдо не изисква допълнително покритие, което значително намалява риска от замърсяване. И тъй като пластмасовото дъно е по-лесно за работа, не е необходимо лепило, за да го фиксирате към дъното на петриевото блюдо. Елиминирайте възможността за изтичане или цитотоксичност.
