процес на клетъчна култура при бозайници
Клетките на бозайниците преминават през процеса на извличане на тъкани, първична култура и субкултура. Субкултурата може да бъде разделена на култура от клетъчна линия и култура на клетъчна линия според условията. Всеки процес е описан накратко, както следва:
Първична култура: След като тъканта се отстрани от животното, тя се смила, третира се с различни ензими (обикновено трипсин), хелатиращи агенти (обикновено EDTA) и механични методи (повторна аспирация и издухване с пипета) и след това се диспергира в отделни клетки, култивирани в подходяща среда, която позволява на клетките да оцелеят, да растат и да се размножават. Първичната клетъчна култура обикновено се отнася до клетъчна култура в рамките на 10 пасажа след отстраняване на клетките от животно.
След първична клетъчна култура, клетъчно делене и размножаване, културата постепенно се увеличава, растежът запълва пространството на културата и след това контактува един с друг, което води до контактно инхибиране и скоростта на растеж постепенно се забавя или дори спира. Той трябва да бъде повторно засаден в нови колби за култура за субкултура.
Пасаж (пасаж): Първичните клетки се изваждат от колбата за култура, клетъчната суспензия се приготвя и се разделя на две или повече колби за култура за по-нататъшно култивиране, което се нарича субкултура.
Клетъчна линия: Клетъчната линия е клетъчна линия след първия пасаж в първичната култура. Ако времето за оцеляване на клетъчна линия е ограничено, то се нарича крайна клетъчна линия. Клетъчна линия, която придобива неограничен репродуктивен капацитет и продължава да оцелява, се нарича непрекъсната клетъчна линия или безкрайна клетъчна линия.
Клетъчна линия: От биологично идентифицираните клетъчни линии, клетъчната популация, образувана чрез изолиране на една клетка, култура или скрининг, се нарича клетъчна линия. След това клетъчни популации с различни форми се изолират и култивират от първичната клетъчна линия за образуване на субклони.
Условия на клетъчна култура при бозайници
Различните клетки на бозайници изискват основни условия на култура на всеки етап
1. Стерилна и нетоксична среда: асептично третиране на хранителната среда и цялото оборудване за култивиране; добавяне на антибиотици към хранителната среда за предотвратяване на замърсяване по време на процеса на култивиране; редовна подмяна на хранителната среда за отстраняване на метаболитите, за да се предотврати увреждане на култивираните клетки.
2. Хранене: Течната синтетична среда съдържа захари, аминокиселини, фактори, стимулиращи растежа, вода, неорганични соли, микроелементи и др. Обикновено е необходимо да се добавят естествени компоненти като плазма и серум
3. Подходяща температура и стойност на pH: Оптималната температура за клетките на човека и бозайниците е 36±0.5 градуса. Подходящата стойност на pH е 7.2-7.4.
4. Газова среда: Газовата среда обикновено е смесен газ "95 процента въздух плюс 5 процента въглероден диоксид". Кислородът е газ, необходим за клетъчния метаболизъм, а въглеродният диоксид поддържа pH на средата.