Клетъчната културална среда е хранителната основа за изкуствено имитиране на in vivo средата на растеж на животински клетки и поддържане на оцеляването и пролиферацията на клетките in vitro. хранително вещество. И така, какви са често срещаните проблеми при използването на среда за клетъчна култура? Да направим анализ.
1. Избор на буферна система и промяна на pH на средата за клетъчна култура
Тъй като оптималното pH за повечето клетки е между 7.{1}} и 7,4, отклоненията от този диапазон могат да имат вредни ефекти върху клетъчния растеж. Изискванията за pH на различните клетки обаче не са напълно еднакви. Първично култивираните клетки обикновено имат слаба толерантност към флуктуации на рН, докато безкрайните клетъчни линии имат силна толерантност. Следователно в първичната култура буферната система в хранителната среда е по-важна. Общата среда за клетъчно култивиране използва балансирана солева система, но различни културни среди или една и съща серия от културни среди използват различни балансирани солеви системи. Например, серия 199 и серия MEM имат системна културна среда на Ханкс и системна култура на Ърл. база. Някои среди не са гореспоменатата конвенционална балансирана солева система, като среда RPMI1640, среда F12. Балансираната солева система на MEM среда с нисък серум също не е конвенционална балансирана солева система и буферният капацитет на балансираната солева система е по-силен от този на конвенционалната балансирана солева система.
клетъчна култура
Има много причини за спад на pH по време на култивиране на клетки. Когато клетките растат много бързо, стойността на рН обикновено пада бързо, което може да се реши чрез навременно преминаване, увеличаване на съотношението на преминаване или намаляване на серумния обем. В допълнение, прекалено затягане на капачката на бутилката с култивиране, недостатъчен буферен капацитет на буферната система NaHCO3, неправилна концентрация на сол в културната среда, бактериално, дрождено или гъбично замърсяване също могат да доведат до често бързо спадане на pH. Понастоящем можете да го разрешите по следните начини:
1) Увеличете концентрацията на NaHCO3 в хранителната среда или намалете концентрацията на CO2 в инкубатора. Когато съдържанието на NaHCO3 е между 2.0 g/L и 3,7 g/L, съответната концентрация на CO2 е 5~10 процента;
2) Преминете към CO2-независима културална среда;
3) Правилно разхлабете капачката на бутилката. Добавете HEPES буфер към културалната среда, за да направите крайната концентрация 10-25 mM;
4) Използвайте културалния разтвор на основата на солта на Earle в CO2 културална среда и използвайте културалния разтвор, приготвен от Hanks's сол в атмосферна културална среда;
5) Изхвърлете културата или стерилизирайте с антибиотици, ако причината е замърсяване.
2. Няколко важни добавки обикновено се използват в среди за клетъчни култури и проблеми, на които трябва да се обърне внимание в процеса на употреба
Феноловото червено се използва като индикатор за рН в среди за клетъчни култури. Като цяло стойността на рН на средата може да се прецени по индикаторния ефект на фенолното червено, но съдържанието на фенолно червено в среда за клетъчна култура с ниско съдържание на серум или без серум е различно от това в обикновена среда за клетъчна култура и не може да се наблюдава с невъоръжено око или рН стойността се определя емпирично и се препоръчва използването на рН метър за измерване. Феноловото червено обикновено няма значителен ефект върху качеството на биологичните продукти, произведени в среда за клетъчна култура, съдържаща серум, и може също да бъде отстранено чрез техники за пречистване, но фенолното червено може да причини вътреклетъчен дисбаланс на натрий/калий в среда за клетъчна култура без серум , засягащи клетъчния растеж.
плоча за клетъчни култури
Натриевият бикарбонат се използва главно като буферна система в среда за клетъчни култури и също така има ефект на регулиране на осмотичното налягане. Обикновено препоръчителното количество натриев бикарбонат в инструкциите за употреба на продукта е стандартно и безопасно количество, което се получава въз основа на практически опит на научна основа. Въпреки това, поради различни клетъчни линии (щамове), една и съща клетка може да се адаптира към различни среди (различна клетъчна толерантност и т.н.) и има регионални различия в качеството на водата и т.н., които също могат да бъдат леко модифицирани при действителното производство процес, но използването на Тези, които трябва да направят съответните тестове (физикохимични тестове и тестове за производство на клетки и др.).
HEPES е нейонен буфер с добър буферен капацитет в диапазона на pH от 7,2 до 7,4 и може да бъде токсичен за някои клетки при високи концентрации. HEPES буферът може да се използва с ниски нива на натриев карбонат (0.34g/L), за да се компенсира повишаването на осмотичното налягане, причинено от добавянето на допълнителен HEPES. Безопасният му диапазон на концентрация е 10 ~ 25 mmol/L.
Натриевият пируват може да се използва като алтернативен източник на въглерод в клетъчната култура и въпреки че клетките предпочитат глюкозата като източник на въглерод, клетките могат също да метаболизират натриевия пируват в отсъствието на глюкоза.
Глутаминът е много нестабилен в разтвор. Може да се разложи до 50 процента при 4 градуса за 1 седмица. Най-добре е да го приготвите отделно при употреба, да го съхранявате в хладилник с -20 градуса и да го добавите към средата за клетъчна култура преди употреба.